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http://dspace.sti.ufcg.edu.br:8080/jspui/handle/riufcg/9822| Title: | Expressão temporal e comparativa de genes efetores intracelulares de Phytopythora parasitica durante a interação com citros. |
| Other Titles: | Temporal and comparative expression of intracellular effector genes of Phytopythora parasitica during interaction with citrus. Expresión temporal y comparativa de genes efectores intracelulares de Phytopythora parasitica durante la interacción con cítricos. |
| ???metadata.dc.creator???: | CORREIA, Ana Luiza Guedes. |
| ???metadata.dc.contributor.advisor1???: | CAMPOS, Magnólia de Araújo. |
| ???metadata.dc.contributor.referee1???: | LIMA, Liziane Maria de. |
| ???metadata.dc.contributor.referee2???: | LOPES, Marcus José Conceição. |
| Keywords: | CRN;RXLR;Citrus aurantium;RT-qPCR;NCR |
| Issue Date: | 2014 |
| Publisher: | Universidade Federal de Campina Grande |
| Citation: | CORREIA, Ana Luiza Guedes. Expressão temporal e comparativa de genes efetores intracelulares de Phytopythora parasitica durante a interação com citros. 2014. 48 fl. (Trabalho de Conclusão de Curso – Monografia), Curso de Licenciatura em Ciências Biológicas, Centro de Educação e Saúde, Universidade Federal de Campina Grande, Cuité – Paraíba – Brasil, 2014. |
| ???metadata.dc.description.resumo???: | Espécies de Phytophthora, assim como muitos outros patógenos, secretam proteínas efetoras que são capazes de modular a imunidade inata da planta e promover a colonização do hospedeiro. As proteínas efetoras de oomicetos dividem-se em duas classes: efetores apoplásticos/extracelulares e citoplasmáticos/intracelulares. O objetivo desse trabalho foi analisar a expressão temporal e comparativa de genes efetores intracelulares de Phytophthora parasitica durante a interação com citros, por meio de RT-qPCR (reverse transcriptase-quantitative PCR). Para isso foram realizados bioensaios de interação de discos de folhas de laranja azeda (Citrus aurantium) e micélio do isolado IAC095 de Phytophthora parasitica, nos tratamentos inoculados e não inoculados (folhas apenas), nos tempos 0, 12, 24, 36 e 48 horas, com 5 repetições biológicas para cada tempo. RNAs total de cada uma das amostras de todos os tratamentos foram isolados pelo método com SDS/fenol e analisados quanto a quantidade e qualidade por eletroforese em gel de agarose e espectrofotometria. cDNAs fitas simples foram sintetizados para 3 repetições biológicas de cada tempo estudado/tratamento. As condições de cultivo e manseio do material vegetal e de Phytophthora parasitica durante o bioensaio foram fundamentais para a obtenção de RNAs de qualidade e para as respostas biológicas a serem analisadas. O método empregado para o isolamento de RNAs de folhas de citros e mistura de folhas de citros e Phytophthora parasitica foi bem sucedido. A quantidade e qualidade dos RNAs extraídos variaram entre as amostras, nos diferentes tempos estudados. DNA de Phytophthora parasitica amplificado com o primer CRN foi um bom controle positivo para comparar com amostras de RNAs digeridas com DNase I para eliminação de DNAs contaminantes. A quantidade dos cDNAs sintetizados estimada por espectrofotometria para DNA fita simples foi diagnóstico da presença dos cDNAs nas amostras. A expressão de genes efetores RXLR foi visualizada nas amostras I0h e I24h, de acordo com a análise quantitativa. |
| Abstract: | Phytophthora species, such as many other pathogens, secrete effector proteins that are able to module the plant innate immunity to promote the host colonization. The Oomicet effector proteins can it divided into two classes: apoplastics/extracellular and citosolics/intracellular effectors. The objective of this work was to analyse the temporal and comparative expression of intracellular effectors from Phytophthora parasitica during the citrus interaction, by using RT-qPCR (reverse transcriptase-quantitative PCR). Then, interaction bioassays were performed using leaf discs of acidic orange (Citrus aurantium) and micelia of Phytophthora parasitica IAC095 isolate for inoculate treatment and only leaf discs form uninoculated treatment, in times 0, 12, 24, 36 e 48 hours, with 5 biological repetitions for each time. Total RNAs from each sample of all treatmens were isolated by using a SDS/fenol method and analyzed in relation to quantity and quality by electrophoresis in agarose gel and spectrophotometry. Single strand cDNAs were synthesized for 3 biological repeticions from each studied time/treatment. The cultive and manuser conditions of the plant material and Phytophthora parasitica during the bioassay were fundamentals to obtaining of RNAs of quality and to biological responses to be analysed. Th employed method to isolation of citrus leaf RNAs and mix of citrus leaf and Phytophthora parasitica RNAs was successfully. The quantity and quality of extracted RNAs varied among samples in different studied times. Phytophthora parasitica DNA amplified with the CRN primers was a good positive control to comparing with sample RNAs digested with DNase I, in order to eliminate contaminant genomic DNAs. The quantity of synthesized cDNAs estimated by single strand DNA spectrophotometry was diagnostic for presence of cDNAs into the samples. The expression of RXLR effector genes was visualized into the I0h and I24h samples, according to quantitative analysis. |
| ???metadata.dc.description.resumen???: | Las especies de Phytophthora, como muchos otros patógenos, secretan proteínas efectoras que pueden modular la inmunidad innata de las plantas y promover la colonización del huésped. Las proteínas efectoras de los oomicetos se dividen en dos clases: efectoras apoplásticas/extracelulares y citoplasmáticas/intracelulares. El objetivo de este trabajo fue analizar la expresión temporal y comparativa de genes efectores intracelulares de Phytophthora parasitica durante la interacción con cítricos, utilizando RT-qPCR (PCR cuantitativa con transcriptasa inversa). Para ello se realizaron bioensayos de interacción de discos de hojas de naranja agria (Citrus aurantium) y micelio del aislado IAC095 de Phytophthora parasitica, en los tratamientos inoculados y no inoculados (solo hojas), en los tiempos 0, 12, 24, 36 y 48 horas, con 5 réplicas biológicas para cada tiempo. Los ARN totales de cada una de las muestras de todos los tratamientos se aislaron mediante el método SDS/fenol y se analizaron en cantidad y calidad mediante electroforesis en gel de agarosa y espectrofotometría. Se sintetizaron ADNc monocatenarios para 3 repeticiones biológicas de cada tiempo de estudio/tratamiento. Las condiciones de cultivo y manejo del material vegetal y Phytophthora parasitica durante el bioensayo fueron fundamentales para la obtención de RNAs de calidad y para las respuestas biológicas a analizar. El método empleado para el aislamiento de ARN de hojas de cítricos y mezcla de hojas de cítricos y Phytophthora parasitica fue exitoso. La cantidad y calidad de los RNAs extraídos varió entre las muestras, en los diferentes tiempos estudiados. El ADN de Phytophthora parasitica amplificado con el cebador CRN fue un buen control positivo para comparar con las muestras de ARN digeridas con ADNasa I para eliminar los ADN contaminantes. La cantidad de ADNc sintetizada estimada por espectrofotometría para ADN monocatenario fue diagnóstica de la presencia de ADNc en las muestras. La expresión de los genes efectores RXLR se visualizó en las muestras I0h y I24h, según análisis cuantitativo. |
| Keywords: | CRN RXLR Citrus aurantium RT-qPCR NCR |
| URI: | http://dspace.sti.ufcg.edu.br:8080/jspui/handle/riufcg/9822 |
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